Питательные среды Раппопорта, Эндо, Левина, Рессела, Клиглера: тип среды, состав, назначение, принцип действия. Учесть и оценить результаты посева накопительной культуры на висмут-сульфит агар (вса) Состав среды раппопорт

Среда Раппопорта является средой обогащения и дифференциально-диагностической средой. В ее состав входит: желчный бульон 10%, 2% глюкоза, индикатор (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью; в щелочной среде бесцветный, в кислой – красный). Назначение: для накопления тифо-паратифозных бактерий при посеве крови больного, а также для ориентировочной дифференциации тифо-паратифозных бактерий. Принцип д-я: при росте тифо-паратифозных бактерий из-за ферментации глюкозы происходит диффузное помутнение и покраснение среды. Для паратифозных бактерий, в отличие от брюшно-тифозных, наличие в поплавке газа.

Среда Эндо Состав: МПА, лактоза, индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний. Принцип д-я основан на способности некоторых микроорганизмов разлагать или не разлагать лактозу (сальмонеллы не разлагают и образуют бесцветные колонии).

Среда Левина является слабо селективной и дифференциально-диагностической. В ее составе МПА, тактоза, индикаторы: эозин и метиленовый синий, калий гидрофосфат. Назначение и принцип д-я см. среду Эндо.

Среда Рессела Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, индикатор (водный голубой и розоловая к-та; в щелочной среде розовая, в кислой – синяя). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выделения чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе и лактозе. Принцип д-я:

Среда Клиглера – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, натрий тиосульфат, железо II сульфат, индикатор – феноловый красный (в щелочной среде – красный, в кислой – желтый). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выявления чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе, лактозе и образования Н2S. Принцип д-я: энтеробактерии, имеющие фермент тиосульфат-редуктазу, восстанавливают тиосульфат в сульфит, при этом выделяется сероводород, который реагирует с железо-сульфатом – в рез-те образуется сульфид железа черного цвета.

Серологическая идентификация выделенной чистой культуры с помощью адсорбированных монорецепторных О- и Н- агглютинирующих сальмонеллезных сывороток. Серологическая идентификация проводится в реакции агглютинации на стеке с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, эти сыворотки м.б. 2-х видов: монорецепторными и поливалентными, их получают из видовых иммунных сывороток методом адсорбции антител по Кастеллани.

Серологическая идентификация протекает последовательно в 3 этапа:

1) Установление принадлежности культуры к серогруппам А, В, С, D, Е, рода Salmonella. При этом используют поливалентную О-сыворотку, содержащую антитела против антигенных рецепторов 2, 3, 4, 7, 9, 10. Монорецепторные О-сыворотки применяют против редких серогрупп. При диагностике паратифа А и В, брюшного тифа можно использовать смесь О-сывороток, сорержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.

2) При положительном рез-те для определения принадлежности испытуемой культуры к определенной серогруппе ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: рецептор 2 относится к серогруппе А, рецептор 4 – к серогруппе В, рецептор 7 – к серогруппе С и т.д.

3) После определения серогруппы, определяем ее видовую принадлежность при помощи р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Затем проводят р-цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.

Бактерионосительство при брюшном тифе. Какими серологическими реакциями можно подтвердить хроническое бактерионосительство? Диагностикумы, используемые для этой цели. Единственным доказательством бактерионосительства является выделение от носителя культур S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, с помощью вспомогательных методов: серологическая р-ция и алергическая кожная проба с Vi-тифином (он содержит Vi-антиген, который при взаимодействии с Vi-антителами дает местную аллергическую р-цию в виде покраснения и припухлости в течении 20-30 минут). Положительная р-ция с Vi-тифином говорит о том, что в орг-ме есть Vi-антитела и возможно S. typhi.

Хр. бактерионосительство подтверждается РНГА. При этом используются Vi-диагностикум, т.к. при формировании брюшнотифозного бактерионосительства хар-но проявление Vi-антител; диагностический титр р-ции 1:40.

Способы заражения брюшным тифом. Источник инфекции. Заражение брюшным тифом происходит только оральным путем. Источником инфекции являются больные люди и бактерионосители (представляют опасность для окружающих в течении нескольких лет после перенесенной болезни).

Биопрепараты, применяемые для диагностики, специфической профилактики и лечения тифо-паратифозных заболеваний.

1) Вакцина брюшно-тифозная спиртовая сухая содержит инактивированные этиловым спиртом лиофилизированные брюшно-тифозные бактерии, применяется для профилактики брюшного тифа у взрослых.

2) Вакцина брюшно-тифозная Vi-полисахаридная жидкая – раствор капсульного полисахарида, выделенного из культуры брюшно-тифозных бактерий, очищенного ферментативными и физико-химическими методами. После введения вакцины начинается интенсивное образование Ат и формирование резистентности через 1-2 недели. Для профилактики брюшного тифа у взрослых.

3) Вакцина брюшно-тифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном, состоит из 1+2, которые соединяют непосредственно перед применением. Вакцина стимулирует клеточных иммунитет и образование антител к О- и Vi-антигенам возбудителя брюшного тифа. Для профилактики брюшного тифа у детей 7-14 лет.

4) Бактериофаг брюшно-тифозный в таблетках с кислотоустойчивым покрытием – таблетки из концентрированного лиофилизированного фаголизата сальмонелл брюшного тифа, покрытые слоем АЦФ или содержащие пектин. Для профилактики брюшного тифа по эпидпоказаниям в семейном очаге, больнице, населенном пункте и т.д.

5) Бактериофаг сальмонеллезный групп АВСDЕ – фильтрат фаголизатов, наиболее распространенных сальмонеллезных бактерий (более 10 видов), выпускают в жидком виде и в таблетках с кислотоустойчивым покрытием. Для профилактики и лечения сальмонеллезов.

Сальмонеллез.

Особенности антигенного строения сальмонелл (О -, Н -, Vi –антигены), их химическая природа, локализация. Классификация сальмонелл по Кауфману-Уайту. Серогруппы, серовары. О-антиген (соматический) – термостабильный, располагается в клеточной стенке, по своей природе явл-ся полисахаридно-белково-липидным комплексом. Специфичность этого антигена зависит от того, с каким полисахаридом он связан (он разный у сальмонелл различных групп). Антигенные рецепторы обозначаются цифрами – 1, 2, 3 и т.д.

К-антиген (футлярный) – термолабильный, находится в клеточной стенке более поверхностно, чем О-антиген. У сальмонелл есть М-Аг и Vi-Аг, которые относятся к К-антигенам.

Н-антиген (жгутиковый) – термолабильный, по своей природе это белок (флагеллин), располагается в жгутиках. У бактерий одного и того же вида он может состоять из двух комплексов, которые отличаются по серологической специфичности. Это двухфазные бактерии, для каждой из фаз хар-ны соответствующие антигенные комплексы: антигены 1-й фазы (специфической), обозначаются буквами a, b, c и т.д.; а антигены 2-й фазы (неспецифической) – 1, 2, 3 и т.д.

Кауфман и Уайт на основе антигенной структуры разделили всех представителей рода сальмонеллы на серологические группы, основанные на признаке общности О-антигенов, где каждая группа имеет определенного антигенного рецептора, которого нет у представителей других групп. Внутри группы сальмонеллы делятся на виды (серовары) по различию строения Н-антигенов 1 или 2 фазы.

Основные источники сальмонеллезной инфекции. Возбудители, их морфологические свойства и биохимические тесты, применяемые для дифференциации сальмонелл. ПТИ чаще всего вызываются саальмонеллами, входящими в серогруппы В, С, D, Е, т.е. заб-ния являются зооантропонозными. Источником инфекции S. typhimurium (серогруппа В) м.б. мыши, голуби, домашние птицы и их яйца, вторичным м.б. заражены другие продукты. Источником инфекции S.choleraesuis (серогруппа С) – свиньи; источник инфекции S. enteritidis (серогруппа D) – крупный рогатый скот.

Факторы патогенности сальмонелл, вызывающие пищевые токсикоинфекций. Обладают факторами адгезии и колонизации, факторами инвазии. У них есть эндотоксин с широким спектром д-я, многие из них обладают энтеротоксинами (LT и/или ST-токсины), которые нарушают ф-ции аденилат- и гуанилатциклазной систем энтероцитов --- нарушение водно-солевого обмена --- диарея. У некоторых сальмонелл есть цитотоксин, который нарушает синтез белка в эритроцитах --- гиперсекреция и нарушение энтеросорбции жидкости в тонком кишечнике --- диарея.

В патогенезе большую роль играет попадание с пищей большого кол-ва возбудителей. Попав в кишечник сальмонеллы прикрепляются к его эпителию и начинают размножаться --- в подслизистое пространство и лимфатические образования стенки киш-ка (далее там размножаются и погибают, высвобождая эндотоксин), т.к. попадает также эндотоксин извне, то происходит его массивное накопление --- интоксикация (тяжелая, с лихорадкой, нарушениями со стороны НС и ССС) и диарея. Если сальмонелл в орг-м с пищей попало малое кол-во, то заб-е протекает по типу гастроэнтерита с диареей, но без интоксикации и повышения температуры.

Перечислите исследуемые материалы и этапы бактериологической диагностики пищевой сальмонеллезной инфекции. Материалами являются испражнения, моча, рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты.

На предварительном этапе посев материала на селенитовую среду или среду Мюллера – рост культуры вызовет помутнение среды. На 1-м этапе посев на чашке со средами Эндо, Плоскирева, висмульт-сульфит агар (на средах Эндо и Плоскирева выросли полупрозрачные бесцветные lac- колонии, на висмульт-сульфит агаре коричневые и черные). На 2-м этапе - пересев подозрительных колоний уколом и штрихом на комбинированные среды Клиглера или Рессела. На среде Клиглера столбик желтый, скошенная часть розового цвета, почернение в нижней части среды, в среде пузырьки газа. На среде Рессела – столбик синего цвета, скошенная часть розовая, пузырьки газа. На 3-м этапе – идентификация: а) морфологические св-ва – в мазке, окрашенном по Граму (при микроскопии видны грамотрицательные палочки с закругленными концами); б) б/хим св-ва – в тест-системе АPI-20Е; в) серологическая идентификация. На 4-м этапе производится учет полученных рез-тов и заключение.

Среда Мюллера – среда обогащения. Состав: МПБ, мел, р-р Люголя, натрий тиосульфат. Назначение: для накопления сальмонелл при посеве материала с малым кол-вом возбудителя и/или сильно загрязненного сопутствующей флорой. П/д: тетратионат натрия, который образуется в среде, подавляет рост сопутствующей флоры --- способствует росту сальмонелл; среда мутнеет.

Селенитовая среда – среда обогащения. Состав: пептонная вода, лактоза, фосфатный буфер, натрий гидроселенит. Назначение: для накопления сальмонелл и шигелл. П/д: натрий гидроселенит подавляет рост сопутствующей флоры --- способствует росту сальмонелл и шигелл; среда мутнеет.

Висмут-сульфит агар – селективная среда. Состав: МПА, сульфит висмута, сульфат железа, фосфат натрия, бриллиантовый зеленый. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний сальмонелл и протея. П/д: сальмонелла образует из сульфата железа сероводород, который взаимодействует с бесцветным сульфитом висмута и переводит его в сульвит висмута черного цвета (поэтому колонии сальмонелл черного цвета). Рост гр+ флоры и многих энтеробактерий подавляется.

Среда Гисса – дифференциально-диагностическая. Состав : МПА (0,4%), углеводы, индикатор: бромкрезол пурпурный. Назначение: определение спектра сахаролитической активности с целью идентификации выделенной культуры энтеробактерий, а также и др. бактерий. П/д: при ферментации углевода до кислых продуктов цвет среды переходит в желтый, при газообразовании – пузырьки.

Серологическая идентификация выделенной культуры сальмонелл.

Последовательность серологической идентификации:

1) культуры испытывают в р-ции агглютинации с адсорбированной поливалентной О-сывороткой, содержащей антитела против антигенных рецепторов 2, 4, 7, 9, 3, 10.

2) При положительном рез-те ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, которая входила в состав поливалентной: рецептор 2 (серогруппа А), рецептор 4 (серогруппа В), рецептор 7 (серогруппа С) и т.д.

3) После того, как установят серогруппу, к которой относится культура определяют ее видовую принадлежность (серовариант) с помощью р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов первой фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Далее р-ция агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2 фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.

Генерализованный сальмонеллез. Наиболее часто выделяемый возбудитель - госпитальные штаммы S. typhimurium, которые адаптировались к орг-му чел-ка. Возникает в условиях стационара как внутрибольничной инфекции. Источником явл-ся не только пищевые продукты, но и бактерионосители. Контактно-бытовой путь распространения. Это ОКИ с длительным тяжелым течением по типу тифоидной или токсикосептической инф-ии. Им присущи все факторы патогенности, характерные для S. typhimurium, а также отличаются повышенной вирулентностью, длительным сохранением на объектах внешней среды и обладают резистентностью ко многим а/б.

Рапопорт среда Рапопорт среда

среда обогащения, применяемая для выделения сальмонелл из крови. Для ее изготовления к 10% желчному бульону с рН 7,2 добавляют 2% глюкозы (предварительно разведенной в 5 мл дистил. воды) и 1% индикатора Андраде (или 0,1% бром-крезолового пурпурового). Смесь разливают по 50 мл во флаконы с поплавками размерами 60x8 мм. Стерилизуют 3 дня по 30 мин текучим паром. Засевают 5 -10 мл свежевзятой крови. Инкубируют при 37°С несколько дней. При росте сальмонелл среда мутнеет, окрашивается в красный или желтый цвет, в поплавке может появиться газ. Пересевают на среды Эндо, Расселла, Олькеницкого.

(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)

Смотреть что такое "Рапопорт среда" в других словарях:

- (М. А. Рапопорт) твердая селективная дифференциально диагностическая питательная среда для выделения энтеробактерий, содержащая глицерин, бычью желчь и кислый фуксин … Большой медицинский словарь

- (М. А. Рапопорт; А. Вайнтрауб) жидкая селективная питательная среда для выделения из крови возбудителей брюшного тифа, содержащая мясопептонный бульон, желчь, индикатор Андраде, глюкозу или маннит … Большой медицинский словарь

- (ые) (ы) искусственный субстрат, представляющий собой сбалансированную смесь питательных веществ в концентрациях и сочетаниях, необходимых для роста и деления микроорганизмов или клеток высших организмов. Питательная среда Адамса см. Адамса… … Медицинская энциклопедия

См. Рапопорт среда … Большой медицинский словарь

См. Рапопорт Вайнтрауба среда … Большой медицинский словарь

- (М.А. Рапопорт; А. Вайнтрауб) жидкая селективная питательная среда для выделения из крови возбудителей брюшного тифа, содержащая мясопептонный бульон, желчь, индикатор Айдраде, глюкозу или маннит … Медицинская энциклопедия

- (М.А. Рапопорт) твердая селективная дифференциально диагностическая питательная среда для выделения энтеробактерий, содержащая глицерин, бычью желчь и кислый фуксинон … Медицинская энциклопедия

- (теория систем) научная и методологическая концепция исследования объектов, представляющих собой системы. Она тесно связана с системным подходом и является конкретизацией его принципов и методов. Первый вариант общей теории систем был… … Википедия

ПАРАТИФ - ПАРАТИФ. Содержание: Бактериология ♦ ................. 719 Эпидемиология.................. 727 Этиология..................... 728 Статистика. ................... 729 Патогенез..................... 732 Патологическая анатомия............… … Большая медицинская энциклопедия

Бенцион (Борис) Захарович Мильнер Бенцион Мильнер Дата рождения: 10 ноября 1929(1929 11 10) (83 года) Место рождения: Черкассы, Украинская ССР, СССР … Википедия

Леч., пед. ф-ты 2006

ЗАНЯТИЕ 18

Тема: Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов А и В, сальмонеллезов.

Цель: На основе знаний биологии сальмонелл – возбудителей брюшного тифа, паратифов А, В и пищевых токсикоинфекций, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию вызываемых ими заболеваний.

Знать:

Особенности биологии сальмонелл, определяющие их роль в инфекционной патологии человека.

Патогенез брюшного тифа, паратифов А, В, пищевых токсикоинфекций.

Материал и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых сальмонеллами.

Специфическую профилактику и терапию заболеваний, вызываемых сальмонеллами.

Уметь:

Учесть и оценить результаты посева крови на среде Раппопорта или желчном бульоне.

Учесть и оценить результаты посева накопительной культуры на висмут-сульфит агар (ВСА).

Провести идентификацию исследуемой гемокультуры с учетом морфо-тинкториальных (метод Грама), биохимических (первичная идентификация на среде Клиглера), антигенных (РА с поливалентной сальмонеллезной сывороткой групп А, В, С, Д, Е) свойств.

Учесть и оценить результаты «пестрого ряда», РА с монорецепторными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками с целью идентификации и дифференциации сальмонелл.

Учесть и оценить результаты РА Видаля, РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом.

Контрольные вопросы:

Классификация и морфобиологические свойства сальмонелл.

Факторы вирулентности сальмонелл.

Особенности экологии, эпидемиологии и патогенеза брюшного тифа, паратифов А и В, пищевых токсикоинфекций сальмонеллезной этиологии..

Материалы и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых сальмонеллами.

Специфическая профилактика и терапия заболеваний, вызываемых сальмонеллами.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИ PC ):

Провести бактериологическое исследование крови с целью установления этиологии заболевания:

Учесть и оценить результаты посева крови обследуемого с подозрением на брюшной тиф.
Учесть и оценить результаты посева накопительной культуры на висмут-сульфит агар (вса).

Изучить выделенную от обследуемого культуру на среде Клиглера (демонстрация) и МПА:

учесть биохимическую активность культуры на среде Клиглера;

приготовить фиксированный препарат из культуры на МПА, окрасить по Граму, промикроскопировать;

поставить и учесть результаты РА на стекле с исследуемой культурой на МПА и поливалентной сальмонеллезной сывороткой групп А, В, С, Д, Е;

оценить полученные результаты.

Учесть и оценить результаты изучения биохимических («пестрый ряд»), антигенных (РА с адсорбированными монорецепторными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками) свойств.

На основании полученных результатов сделать вывод, заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

Учесть и оценить результаты РА Видаля с сывороткой обследуемого с подозрением на брюшной тиф и брюшнотифозными, паратифозными А и В диагностикумами.

Учесть и оценить результаты РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом и сыворотками обследуемых из декретированной группы (работники пищевой промышленности).

Изучить и описать в протоколе биопрепараты: адсорбированные агглютинирующие поливалентные групп А, В, С, Д, Е, монорецепторные О- и Н-сыворотки; брюшнотифозный бактериофаг; сальмонеллезный бактериофаг; сальмонеллезные диагностикумы, брюшнотифозная вакцина.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

Проведите бактериологическое исследование крови обследуемого с подозрением на брюшной тиф:

1 этап. Выделение гемокультуры является наиболее ранним и достоверным методом диагностики брюшного тифа, паратифов А и В. В начале болезни для исследования забирают, соблюдая правила асептики, 5-10 мл крови из локтевой вены; в более поздние сроки – 15-20 мл. Кровь сразу засевают на желчный бульон или среду Раппопорт, соблюдая соотношение крови и питательной среды 1:10, для подавления бактерицидных свойств крови. Флаконы маркируют и до транспортировки в лабораторию содержат при комнатной температуре, но не в холодильнике! Посевы инкубируют при 37 в течение 7 дней, каждый день просматривая посевы для выявления наличия роста.

Правила забора крови: медперсоналу при заборе крови необходимо соблюдать меры индивидуальной защиты (например, использование резиновых перчаток), предусмотренные при работе с кровью. Кожу над пунктируемой веной тщательно обрабатывают 70% этиловым спиртом, затем 1-2% настойкой йода 30 с (от центра будущего прокола по направлению к периферии). Обработанному участку кожи дают высохнуть , затем производят венопункцию, после чего вновь обрабатывают участок 70% этиловым спиртом для удаления избытка йода, во избежание раздражения кожи.

Среда Раппопорта содержит желчный бульон, глюкозу или маннит, индикатор Андреде и поплавок. Она является для сальмонелл средой накопления, а также дифференциально-диагностической средой. При размножении брюшнотифозных бактерий в среде Раппопорта в результате расщепления глюкозы (маннита) до кислоты меняется цвет среды с желтого на красный, а в случае образования не только кислоты, но и газа, что характерно для паратифозных бактерий, последний накапливается в поплавке, вытесняя часть питательной среды. Из среды накопления при наличии признаков роста делают высевы на среду Эндо (Левина) и параллельно на среду Клиглера (МПА), так как в положительных случаях растет, как правило, чистая культура. В случае загрязнения среды накопления при нарушении правил взятия крови, среда Эндо позволяет выделить чистую культуру. Посевы инкубируют при 37 18-24 ч.

3 этап. Оцените результаты посева накопительной культуры на среду Эндо (Левина), проведите первичную идентификацию выделенной гемокультуры с учетом морфо-тинкториальных, биохимических (на среде Клиглера) и антигенных свойств. Для изучения морфо-тинкториальных и антигенных свойств используйте гемокультру на скошенном МПА.

На среде Клиглера S . typhi ферментирует глюкозу (маннит) с образованием кислоты (пожелтение столбика агара), не расщепляет лактозу (окраска скошенной части агара не изменяется) и образует H 2 S (почернение среды). Паратифозные сальмонеллы ферментируют глюкозу (маннит) с образованием кислоты и газа, поэтому меняется не только цвет столбика, но и происходит его разрыв.

Сальмонеллы – это грамотрицательные полиморфные палочки, размером, расположенные, в основном, одиночно.

С чистой культурой грамотрицательных палочек, выросшей на обычном агаре, соответствующих по биохимии сальмонеллам, поставьте РА на стекле с адсорбированной поливалентной сальмонеллезной сывороткой групп А, В, С, Д, Е (см. занятие № 10). Положительный результат свидетельствует, что культура принадлежит к р. Salmonella . Для окончательной идентификации культуру сеют в среды “пестрого ряда” и ставят РА на стекле с соответствующими адсорбированными монорецепторными О- и Н-сыворотками (демонстрация).

4 этап. Учтите результаты «пестрого ряда». На основании всех полученных результатов определите видовую принадлежность выделенной гемокультуры; результаты занесите в протокол, заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

При серодиагностике брюшного тифа и паратифов А и В РА Видаля ставится одновременно с 4-мя диагностикумами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными. Это связано с тем, что клинически брюшной тиф, паратифы А и В практически не отличаются. Поэтому выявление специфических антител позволяет установить этиологию заболевания.

При интерпретации результатов РА Видаля необходимо помнить о том, что реакция может быть положительной не только у больных (инфекционный Видаль), но и при любом лихорадочном состоянии, если больной прежде болел брюшным тифом (анамнестический Видаль) и у привитых (прививочный Видаль). РА Видаля также может носить групповой характер, так как в сыворотке больного имеются антитела не только с специфическим, но и к групповым антигенам. Критерием дифференциации инфекционного Видаля является выявление нарастания титра специфических антител в 2 и более раза при исследовании парных сывороток.

Кроме того, дифференцированное определение О- и Н-антител позволяет установить период развития заболевания, так как О-антитела накапливаются в разгаре заболевания, а Н-антитела – в период реконвалесценции.

Критерием оценки результатов РА Видаля при однократно взятой сыворотке является диагностический титр, равный у невакцинированных взрослых 1:200, а у невакцинированных детей – 1:100 (см. занятие № 10).

РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом используется чаще всего для выявления бактерионосительства S . typhi . Диагностический титр при оценке результатов равен 1:40(см. занятие № 10).

Изучите и опишите в протоколе биопрепараты: адсорбированные агглютинирующие поливалентные групп А, В, С, Д, Е, монорецепторные О- и Н-сыворотки; брюшнотифозный бактериофаг; сальмонеллезный бактериофаг; сальмонеллезные диагностикумы, брюшнотифозная вакцина.

Лак (-) Лак (-) Лак (-)

Бактерии, расщепляющие лактозу -lac(+), дают окрашенные колонии, потому, что___________________________________________________. Бактерии, не расщепляющие лактозу – lac(-) дают бесцветные колонии.

Среда Олькеницкого (__________________________________________

____________________________________). Среда разливается в виде скоса, используется для выделения чистой культуры энтеробактерий.

Лактоза до КГ

Глюкоза до КГ

исходная с посевом

Среды для определения протеолитических свойств бактерий

1. МПБ с индикаторными бумажками:

а) на индол

б) на сероводород

в) на аммиак

Желатин

Молоко

Работа № 2: «Пестрый ряд» кишечной палочки

«Пестрый ряд» состоит из набора сред Гиса и МПБ с индикаторными бумажками на определение конечных продуктов расщепления белков.

Лактоза Глюкоза Манит Мальтоза Сахароза МПБ

H 2 S индол

Результат: кишечная палочка ферментирует ____________________

__________________________________________________________

Работа № 3: Факторы патогенности стафилококка

1. Лецитовиттелаза (лецитиназа ) – разрушает лецитин клеточных стенок, выявляется при посеве на ЖСА (МПА + желточная взвесь + 10% хлорид натрия).

2. Плазмокоагулаза – сворачивает плазму.

Посев проводят в 0,5 мл плазмы крови кролика.

исходная сгусток

3. Гемолизин – токсин, расщепляющий эритроциты.

Определяется на кровяном агаре (КА)

4. Фибринолизин – токсин, расплавляющий фибрин.

Определяется посевом в свернутую кровь.

сгусток крови лизис сгустка

Работа № 4: Способы создания анаэробных условий.

Физические

Химические

Биологические

Метод Перетца Принцип:

______________________

Метод Фортнера Принцип:

_____________________

аэроб анаэроб

Трубки Вейон-Виньяля Принцип:

_____________________

Работа 5: Среды для выращивания анаэробов

1. Среда Цейсслера (глюкозо – кровяной агар) в чашке Петри

Принцип:

___________________________

2. Среда Китта-Тароцци (сахарный бульон, кусочки паренхиматозных органов, высокий столбик, слой вазелинового масла).

______________________

исходная с ростом.

4. Тиогликолевая среда – используется как жидкая, так и полужидкая и плотная.

5. Молоко по Тукаеву (1% пептонная вода + 5% обезжиренного молока) используется для выявления протеолитической активности бактерий.

Работа 6: Рост анаэробов при посеве на молоко.

Большинство анаэробов вызывают створаживание молока.

Для приготовления мазка стерильной бактериологической петлей берут содержимое пробирки со дна пробирки. Окрашивают по Граму. Клостридии представляют крупные Грам (+) палочки с непрокрашенными терминальными или субтерминальными спорами.

Клостридии Грам (+)

Работа № 7: Схема выделения чистой культуры анаэробов.

I этап. Изучение исследуемого материала: а) микроскопия, б) посев в 5 пробирок со средой Китта-Тароцци (сразу после ее прогревания на водяной бане при t 80 0 С 15-20 мин и быстрым охлаждением).

II этап. Изучение культуральных свойств (характер изменения среды Китта-Тароцци) и получение изолированных колоний по методу Вейнберга (разведения в расплавленном сахарном агаре с последующим помещением в трубки Вейон-Виньяля) -

или по методу Цейсслера (посев с разобщением на глюкозо –

Кровяной агар)

III этап . Изучение колоний. Отсев на среду Китта-Тароцци для накопления чистой культуры.

IV этап . Изучение чистой культуры

а) морфологические и тинкториальные свойства - мазок в окраске по Граму, Гинсу, Ожешко;

б) биохимические – «пестрый» ряд, посев в молоко, на среду Вильсона-Блера и др.,

в) антигенные и токсигенные свойства - на лабораторных животных.

V этап. Учет результатов Заключение о виде.

Работа № 8: Изучение выделенной чистой культуры.

1.Культуральные свойства:

2. Морфологические и тинкториальные свойства в окраске по Граму:

Грам ()

Подпись преподавателя_____________________

Дополнительная информация .
Вопросы для самоконтроля:

1. Факторы агрессии.

2. Ферменты, зависящие от субстрата в среде.

3. Классификация ферментов по направленности действия.

4. Использование ферментов микробов.

5. Среды для выявления факторов патогенности.

6. Состав и назначение среды ЖСА.

7. Методы получения изолированных колоний анаэробов.

8. Принципы создания анаэробных условий в среде Китта-Тороцци.

9. Что такое брожение?

10. Способ получения энергии у облигатных анаэробов.

11. Методы создания анаэробных условий.

12. Жидкие среды для культивирования анаэробов.

13. Среда Вильсона-Блера.

14. Химические методы создания анаэробных условий.

15. На каких средах получают изолированные колонии анаэробов?

16. Как создаются анаэробные условия в микроанаэростате?

17. Конечные продукты расщепления белков.

18. Как выявляют образование сероводорода, индола, аммиака?

19. Реактивы на выявление сероводорода, индола, аммиака.

20. Среды для изучения сахаролитических свойств бактерий.

21. Среды, содержащие лактозу.

22. Как выглядят лак (+) колонии на среде Эндо, Левина, Плоскирева?

23. Конечные продукты расщепления углеводов.

24. Состав и назначение среды Раппопорта.

25. Дифференцирующий компонент среды Раппопорта.

26. Среды для изучения протеолитических свойств.

27. Свойства облигатных анаэробов.

28. Биологические методы создания анаэробных условий.

29. II этап выделения чистой культуры анаэробов.

30. Среды для выращивания анаэробов (жидкие и плотные).

31. Химические методы создания анаэробных условий.

32. Назначение и принцип работы трубок Вейон-Виньяля.

33. Какие бактерии могут существовать без кислорода?

34. Среды для выращивания анаэробов.

35. Как создаются анаэробные условия в эксикаторе?

36. Состав и применение кровяного агара.

37. III этап выделения чистой культуры анаэробов.

38. Состав и назначение среды Цейсслера.

39. Как создаются анаэробные условия в методе Фортнера.

40. Принципы создания анаэробных условий в среде Китта-Тороцци.

Среда Эндо – дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза, индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний. Принцип д-я основан на способности некоторых микроорганизмов разлагать или не разлагать лактозу (сальмонеллы не разлагают и образуют бесцветные колонии).